HBV相关肝硬化患者血清IL-17及IL-22的变化及临床意义
摘要 ：目的探讨血清炎症因子(IL-17、IL-22)在乙型病毒性肝炎(乙肝)患者体内的变化及临床意义。方法:选取44例肝硬化患者，46例肝炎患者,同时选取40例健康志愿者作为对照组,采用酶联免疫吸附法（ELISA 法）的表达水平，分析二者之间的关系以及它们与相关生化指标的相关性，以及对失代偿性肝硬化的预测作用。结果:1、肝硬化患者ALT、AST、TBIL、HBV-DNA等生化指标较肝炎患者与健康人都明显增高（P<0.05），而在肝硬化患者体内ALB指标较肝炎患者与健康人相比明显减低（P<0.05）。2、HBV相关肝硬化患者血清IL-17与IL-22水平呈正相关，IL-17、IL-22水平与ALT、AST、TBIL以及HBV-DNA呈正相关;与血清ALB 呈负相关。3、乙肝失代偿期肝硬化组患者血清IL-17、IL-22水平[（65.36±18.64） ng/ml、（392.38±87.75）pg/ml]显著高于代偿期肝硬化组和健康对照组，且代偿期肝硬化组患者血清IL-17、 IL-122浓度[（42.53±10.19）ng/ml、（300.72±65.47）pg/ml]也明显高于健康对照组（P＜0.05）4、IL-17、IL-22检测对乙肝失代偿期肝硬化的发生有预测作用（AUC=0.768、P=0.0004；AUC=0.761、P=0.0006）。结论:IL-17、IL-22水平可一定程度反映HBV相关肝硬化的严重程度，且在预测失代偿性肝硬化发生方面可作为临床判断的参考指标。
关键词:白细胞介素-17；白细胞介素-22；肝硬化；乙型病毒性肝炎；失代偿期肝硬化
The changes of IL-17 and IL-22 in serum of patients with HBV related cirrhosis and its clinical significance
Abstract:Objective to investigate the changes and clinical significance of serum inflammatory factors (IL-17 and IL-22) in patients with hepatitis B (HBV). Methods: 44 cases of liver cirrhosis and 46 cases of hepatitis patients were selected and 40 healthy volunteers were selected as the control group. The expression level of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to analyze the relationship between the two and their correlation with the related biochemical indexes and the predictive effect on decompensated cirrhosis. Results: 1. The biochemical indexes of ALT, AST, TBIL and HBV-DNA in the patients with liver cirrhosis were significantly higher than those of the hepatitis patients and the healthy people, while the ALB index in the patients with liver cirrhosis was significantly lower than that of the healthy people. 2. The serum levels of IL-17 and IL-22 (65.36 + 18.64) ng/ml and (392.38 + 87.75) pg/ml] in patients with hepatitis B decompensation period were significantly higher than those in the compensatory cirrhosis group and the healthy control group, and the serum levels of IL-17 and IL-122 [(42.53 + 10.19) ng/ml and (300.72 + 65.47) pg/ml] in the compensatory cirrhosis group were significantly higher than those in the patients with compensatory cirrhosis. In the healthy control group (P < 0.05) the level of serum IL-17 and IL-22 in patients with 3 and HBV related cirrhosis was positively related to , and the level of IL-17 and IL-22 was positively correlated with ALT, AST, TBIL, and HBV-DNA, and was negatively correlated with the serum ALB. 4. IL-17 and IL-22 detection can predict the occurrence of hepatitis B decompensated cirrhosis (AUC=0.768, P=0.0004, AUC=0.761, P=0.0006). Conclusion: the levelof IL-17 and IL-22 can reflect the severity of HBV related cirrhosis to a certain extent, and it can be used as a reference index for predicting the occurrence of decompensated cirrhosis.
Key words: IL17, IL22 inflammatory factors,cirrhosis, hepatitis Bdecompensated cirrhosis .
目录
中文摘要 2
Abstract 3
1 引言 4
2、材料与方法 5
2.1 临床资料 5
2.2 诊断标准 6
2.3 主要仪器 6
2.4 主要试剂 6
2.5 标本采集及要求 6
2.6 方法 7
2.7 统计学处理 7
3 结果 8
3.1 实验组与对照组相关生化指标的比较 8
3.2 实验组与对照组血清IL-17,IL-22的变化 8
3.3 HBV相关肝硬化患者不同时期外周血IL-17、IL-22变化 9
3.4 外周血IL-17、IL-22对乙肝失代偿期肝硬化的发生的预测作用 9
4 讨论 11
参考文献 13
谢辞 15
1 引言
乙型肝炎的发病机制还未确定： 但通常认为乙型肝炎病毒本身在攻击人体后，在一定时间内病毒本身不会立即有肝细胞的损伤和病变，也不会由病毒本身直接引起肝纤维化和肝癌，反而是机体自身的组织细胞针对病毒侵犯所产生的细胞免疫和体液免疫才是导致肝细胞损伤，肝纤维化和肝癌的决定因素，机体自身的免疫应答和HBV病毒间的相互作用决定着乙型肝炎的病程发展。肝硬化是指临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。在我国大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成，导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形、变硬从而发展成为肝硬化。早期由于肝脏代偿功能较强，可以没有明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。肝硬化是各种慢性肝病发展的晚期阶段，其并发症多发生率高，且有着较高的死亡率，且发展为肝癌的风险极大。肝硬化的形成过程较为复杂，有多种免疫细胞和细胞因子共同参与了其形成[1-2]。研究报道[3-5]，在HBV感染性肝脏疾病的发病过程中包括IL-17、 IL-22在内的多种细胞因子都发挥了重要作用，但是目前关于这些细胞因子在肝硬化发生发展过程中的关系及对失代偿期肝硬化的预测的研究却较少。因此，本研究拟通过检测HBV相关肝硬化患者外周血IL-17和IL-22的表达水平、分析其与临床指标的相关性，以及它们在失代偿性肝硬化的预测方面的作用，以及为临床的病情评估及早期干预提供理论基础。
2、材料与方法
2.1 临床资料
2017年4月1号到2018年4月1号在太仓市第一人民医院感染科入住的46例乙型肝炎患者，44例肝硬化患者，以及同一阶段在太仓市第一人民医院体检中心体检，且体检结果均正常的40例健康人群。（排除与非病毒肝炎有关的全身性疾病如：肝炎病毒感染，酒精性肝炎、自身免疫性肝炎，以及一些相关并发症如：糖尿病，脑溢血，心功能衰竭，肝功能不全等，并且所选病例以往均未经抗病毒治疗，未含孕妇、哺乳期妇女以及合并有如心脏病等其它严重疾病患者，性别构成及年龄无明显差异（P＞0.05），所有实验对象或者家属都提供了书面知情同意书。）按照患者临床表现，将44例肝硬化患者分为代偿性肝硬化组和失代偿性肝硬化组。将其分为三组，即46例乙型肝炎患者与44例肝硬化患者作为实验组，乙型肝炎患者中男28例，女18例，年龄61 ± 12岁，平均年龄在（60.2 ± 11.3）岁；肝硬化患者中男24例，女20例，年龄61±11岁，平均年龄在（61.2 ± 10.9）岁；40例健康人群作为对照组，其中男18例，女22例，年龄62 ± 11岁，平均年龄在（61.3 ± 10.8）岁，组间年龄、性别等差异均无统计学意义（p>0.05）。
2.2 诊断标准
以2015版的《慢性乙型肝炎防治指南》[6]及2012版《肝衰竭诊疗指南》[7]作为诊断标准。
2.3 主要仪器
WELLWASH洗板机 上海汉诺仪器有限公司
MK3酶标仪 美国ABCAM公司
DHP-9402电热恒温培养箱 上海锡为科学仪器有限公司
-80度超低温冰箱 无锡冠亚恒温制冷技术有限公司
SIEMENS ADVIA 2400 全自动生化分析仪 美国ABCAM公司
贝克曼全自动生化分析仪 西安瑞迈分析仪器有限责任公司
2.4 主要试剂
（1）人IL-17ELISA试剂盒：美国ABCAM公司
（2）人IL-22ELISA试剂盒：美国ABCAM公司
2.5 标本采集及要求
清晨用含促凝剂的真空采血管采集46例肝炎患者，44例肝硬化患者和40位健康人的空腹静脉血4ml，静置15分钟后离心，离心后取上清液，并于-80℃冰箱保存待测。
2.6 方法
采用酶联免疫吸附法（ELISA 法），且测定步骤严格按照试剂盒说明书进行。采用美国ABCAM公司ELISA试剂盒检测实验对象外周血中IL-17、IL-22表达水平， RT-PCR 法检测HBV-DNA载量。采用贝克曼全自动生化分析仪检测肝功能等生化指标。
2.7 统计学处理
试验组的数据分析采用SPSS19.0统计软件处理，其中呈现正态分布的测试结果用均数±标准差（ ± s）表示，组间的比较利用单因素的方差分析，组内的比较采用t检验；变量间的相关性采用Pearson直线相关分析。应用MEDCALC统计软件绘制Roc曲线，并计算p值，敏感度以及特异度等指标，p<0.05时具有统计学意义。
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